| 王星华 1 谭 琰 1 丁海敏 2 张 琦 1 华 茜.TNFalph 和 IL-1bet 靶点抗炎药物筛选细胞模型的构建[J].,2015,15(6):1005-1009 |
| TNFalph 和 IL-1bet 靶点抗炎药物筛选细胞模型的构建 |
| Establishment of Drug Screening Model Targeting TNF-alpha and IL-1beta in Cells |
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| DOI： |
| 中文关键词: 肿瘤坏死因子alpha 白 介素 1beta 抗炎 药物筛选 稳定转染 |
| 英文关键词: TNF-alpha IL-1beta Anti-inflammatory Drug screening Stable transfection |
| 基金项目:国家自然科学基金项目（ 81 072901）； 教育部博士点基金项目（ 2012001 31 10013）；
在读研究生资助项目（ 2014-JYBZZ-XS-029）； 在读研究生资助项目（ 201 4-JYBZZ-XS-013） |
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| 中文摘要: |
| 目 的： 构 建两个高 表达人 TNF琢 和 IL-1茁 细胞系 ，建立抗炎药物筛选细胞模型 。 方 法： 运用 PCR 的方法 从载体pCMVSport-TNF-aplha 和 pCMVSport-IL1beta 上扩 增目 的 基因，以亚克隆方法将目 的 基因 分别 插入真核 表达载体 pcDNA3.1 和
pFLAG-CMV 中，用 单酶切、 PCR 扩增和基因测序的方法鉴定重组效果， 然后将重组成功的质粒转入 HEK293 细胞系内 ， 挑选能
够稳定表达并遗传的单克隆细胞株， 用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析其表达效果。 结果： 三种鉴定方法均显示重组质粒构建
成功。 Western blot 结果显示， 细胞株 T3、T4 均能较高表达炎症因子 TNF-alpha； 细胞株 I2、I3、I5 均能较高表达炎症因子 IL-1beta。 结论：
成功构建了 TNFalpha 和 IL-1bea 靶标的药物筛选细胞模型，为筛选具有抗炎作用的中药提供了一个新平台 。 |
| 英文摘要: |
| Objective:Establish a novel cell-based model for drug screening targeting human TNF-alpha and IL-1bet.Methods:Clone
the target genes of TNF-琢 and IL-1茁 from vectors pCMVSport-TNF琢 and pCMVSport-IL1茁. The target genes were connected to
pFLAG-CMV and pcDNA3.1 respectively. Single endonuclease digestion, PCR reactions and gene sequencing were used to verify
whether the recombinant plasmids were constructed successfully and then they were stable transfected into HEK293 cell line. Detect the
expression level of TNFalpha and IL-1beta in monoclonal with the method of Western blot.Results:Recombinant plasmid was successfully
constructed. Results of Western blot showed that cell line T3 and T4 can be highly express inflammatory cytokines TNF-alpha; cell line I2, I3
and I5 can be highly express inflammatory cytokines IL-1beta.Conclusion:The HEK293 cell-based drug screening model targeting
inflammatory cytokine TNFalpha or IL-1beta has been established here and is available for the screening of anti-inflammatory drugs. |
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