| 王荣花 韦 芳 李惠明 胡 冉 王慧萍.构建一种受 hTERT 启动子和 miR-145 双调控的更为安全的新型溶瘤腺病毒[J].,2014,14(35):6801-6806 |
| 构建一种受 hTERT 启动子和 miR-145 双调控的更为安全的新型溶瘤腺病毒 |
| Construction of a Further Safer Conditional Replicating AdenovirusControlled by hTERT Promoter and miR-145-regulated System |
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| DOI： |
| 中文关键词: 人端粒酶启动子 安全性 miR-145 溶瘤腺病毒 |
| 英文关键词: Human telomerase reverse transcriptase（ hTERT） Safety miR-1 45 Oncolytic adenovirus |
| 基金项目:国家自然科学基金面上项目（ 30672440)；上海市科委创新行动（ 13140902802） |
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| 中文摘要: |
| 目的： 构建一种受人端粒酶逆转录酶（ hTERT）启动子和 miR-1 45 双调控的更加安全的条件复制 型腺病毒。 方法： 在已构建
的 hTERT 启动子调控早期复制 必需基因 E1A 的条件复制型腺病毒 Adzq11 基础上， 再将四个拷贝的 miR-145 的靶序列 加入到
E1A 的 3' 非翻译区，构建新型溶瘤腺病毒 Adzq11 -145T。 应用 Real-time PCR 测定人非小细胞肺癌细胞 A549 和人胚肺成纤维细
胞 HLF 中 miR-145 的表达量； 然后在这两株细胞中， 分别 转染 Adzq11 和 Adzq11 -1 45T 对应的穿梭质粒及感染病毒本身，用
Real-time PCR 检测 E1A 表达量以测定调控效果； 用病毒空斑单位法检测两种病毒的复制 情况；用 CCK8 检测对 A549 和 HLF 细
胞的杀伤作用 。 结果： 构建的新型溶瘤腺病毒 Adzq11 -145T 在 HLF 中复制量明 显低于 Adzq11，其 E1A mRNA 水平和杀伤效应也
显著降低。 而在 A549 中， Adzq11 -145T 在 E1A 表达、病毒复制和溶瘤能力方面较 Adzq11 均无显著降低。 结论： 成功构建出一种
新的受转录和转录后水平双重调控的条件复制型腺病毒 Adzq11 -1 45T， 它比仅加入 hTERT 启动子调控早期复制必需基因 E1A
的腺病毒 Adzq11 更加安全。 |
| 英文摘要: |
| Objectivre:To construct a safer type of conditional replicating adenovirus controlled by human telomerase reverse
transcriptase（ hTERT) promoter and miR-145-regulated system.Methods:Based on oncolytic adenovirus Adzq1 1, whose replication was
controlled by E1 A gene located downstream of tumor-specific hTERT promoter, we inserted four copies of miR-1 45 complementary
sequences into the 3'-untranslated region of the E1 A gene to construct a novel oncolytic adenovirus Adzq1 1-145T. The miR-1 45
expression level in A549 and HLF was detected by using real-time RT-PCR. The E1A mRNA levels post viral infected and plasmid
transfected were determined by real-time RT-PCR. Adenovirus cytotoxicity assay was performed by cell counting kit (CCK8).The viral
titration was detected by Plaque Assay.Results:In normal cell HLF, the E1A mRNA levels, the lysis activity and the replication capacity
of Adq1 1-145T were less significant than those of Adzq11 , while didn't reduced in tumor cell A549.Conclusion:Compared to oncolytic
adenovirus Adzq1 1 controlled by hTERT promoter only, the novel oncolytic adenovirus Adzq1 1-1 45T, double controlled by
hTERTpromoter and miR-145, showed improved safety profiles. |
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