| 陈 博
1,2
赵云程
1
林嘉鹏
1
孙晓岩
2
陈雪梅
2
黄俊成.无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用[J].,2014,14(6):1012-1016 |
| 无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用 |
| The Application of the Separation of Sheep Embryonic Stem Cells inSerum-and Feeder-free Conditions |
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| DOI： |
| 中文关键词: 胚胎干细胞 囊胚 绵羊胚胎 N2B27 |
| 英文关键词: Embryonic stem cells Blastocyst Sheep embryo N2B27 |
| 基金项目:新疆自治区科技计划项目（ 20111113 ）； 新疆自治区科技支疆项目（ 201291147 ）； |
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| 中文摘要: |
| 摘要 目的： 本文采用 N2B27 无血清无饲养层的完全已知成份的培养体系， 通过机械分离法分离不同阶段的绵羊囊胚， 观察不同
阶段囊胚对分离绵羊类胚胎干细胞的影响。 方法： 本实验采用 N2B27 无血清无饲养层成份完全已知的培养体系， 利用机械分离法
对不同阶段的绵羊囊胚进行分离，观察其绵羊类胚胎干细胞的原代集落形成率，以及 AKP 染色，多潜能性候选基因 Oct-4 和
Sox-2 免疫荧光检测。结果：分离早期阶段绵羊囊胚获得的绵羊类胚胎干细胞的形成率显著低于扩张 （孵化） 阶段囊胚 （19.6%
(11/56) vs 36.9%(31/84) ）（ P＜ 0.05 ）， 同时早期和扩张 （孵化） 阶段绵羊囊胚的 AKP 染色和多潜能性候选基因 Oct-4、 Sox-2 的表达
呈阳性。 结论： N2B27 无血清无饲养层培养体系是一种有效分离绵羊类胚胎干细胞的培养基， 同时分离绵羊扩张 （ 孵化 ） 阶段的囊
胚可以显著的提高原代类胚胎干细胞的建系率，为提高绵羊类胚胎干细胞的建系奠定了基础。 |
| 英文摘要: |
| ABSTRACT Objective：To observe the influence of the separation of sheep embryonic stem cells culture blastocysts at
different developmental stages by N2B27 serum- and feeder-free conditions.Methods： Mechanical separation was used to isolate the
culture blastocysts at different developmental stages by N2B27 serum- and feeder-free conditions, and then we observed the
formation rates of primary oESC-like, AKP dying, expression of multipotent candidate genes Oct-4 and Sox-2. Results:The formation
rates of oESC-like of early blastocysts was lower extended blastocysts (19.6% (11/56) vs 36.9%(31/84) ） (P＜ 0.05). It was all positive for
the assays of alkaline phosphatase and expression of multipotent candidate genes Oct-4 and Sox-2. Conclusion:This is an effective
method that the separation of sheep embryonic stem cells in N2B27 serum- and feeder-free conditions. The extended blastocysts can
improve the formation rates of primary oESC-like. |
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